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用于Illumina平台的Small RNA-Seq Library Prep Kit试剂盒



 无需凝胶纯化的用户友好的工作流程

 5小时内即可完成测序文库的制备

 投样量范围广泛:从50pg到1000ng RNA

 例如血浆、血清和尿样等RNA含量较低的样品进行了优化

•  内含i7 index,最可同时对96个样品进行处理


简介


   自从small RNA (sRNA)被发现在基因表达调控中起到关键作用,研究人员已经对一些非编码small RNA产生了浓厚的兴趣并予以特别关注,比如microRNA (miRNA) small interfering RNA (siRNA)Lexogen公司新推出的Small RNA-Seq Library Prep Kit提供了一种简化的文库制备程序,可在短短5个小时内,从small RNA样品生成可直接用于Illumina测序的文库。该试剂盒可用于投入量为100ng-1000ng的细胞总RNA样品,或者50pg-1000ng富集后的small RNA样品,包括诸如血浆、血清和尿样等RNA含量低的样品。该试剂盒内有制备small RNA文库所需要的所有分子试剂,包括接头、引物、酶、缓冲液等。同时,该试剂盒使用一个基于柱子的模块,可以快速纯化制备过程中生成的核酸产物。该试剂盒中还包括了最多96种外源i7 index,能够制备出含有不同index的多重文库。制备的文库可以与单端或者双端测序兼容。通常,对于Small RNA-Seq文库来说,短的读长(SR50)就足够了。


   通过将全新的Small RNA-Seq Kit与SPLIT RNA Extraction Kit结合在一起,Lexogen提供给用户一套完整的small RNA-Seq文库制备方案:先使用SPLIT富集small RNA,然后使用Small RNA-Seq Kit生成测序文库。


工作流程


   Small RNA-Seq试剂盒是基于将接头分子连接到总RNA或者富集后的small RNA的3’端和5’端上进行工作的。文库的制备始于将3’端接头连接到RNA片段上(总RNA,富集small RNA,血浆RNA,血清RNA,尿RNA,或核外RNA),过量的3’端接头会在接下来的柱纯化过程中被去掉,然后将5’端接头连接到RNA片段上,从而得到两端分别加上5’端和3’端接头的RNA片段。之后RNA片段被转成cDNA,接下来扩建cDNA文库,在这一过程中加上完整的接头序列,获取质控和测序所需要的足够多的片段。外部i7 index也在这一步被加到序列上,加入的index可以让多种样品同时进行测序。扩增后的文库接下来通过纯化来浓缩所需片段,同时去除PCR过程中的其它成分,避免其干扰量化结果。绝大多数情况下,特别是当样品RNA为富集的microRNA时,制备好的文库可以直接在Illumina测序仪上进行分析。或者,还可以增加额外的磁珠纯化过程,去除接头-接头干扰片段,或者将small RNA文库从总RNA文库中分离出来,这样就避免了使用small RNA-Seq文库制备过程中常用的较为繁琐的凝胶纯化。如果需要使用磁珠纯化,我们建议使用Lexogen公司的包括了磁珠纯化模块的套餐(目录号 058),最终可以用常用的标准化方法,如微毛细管电泳或者qPCR,来对文库进行定量


1  Small RNA-Seq Library Prep Kit工作流程示意图