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重组蛋白酶K

 

产品简介:

 

  蛋白酶K现有蛋白酶中活性最高的品种来源于林伯氏白色念球菌(Tritirachium album limber的蛋白酶K基因。本产品是由重组酵母表达的基因重组蛋白质,在酶分子结构设计上,参考国内外文献,做了六个定点突变,理论上可以提高酶活性50倍。蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。pH 4pH 12的条件下均有活性,在SDS、尿素或EDTA存在时亦很稳定。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键用于生物样品中蛋白质的降解。此酶经脱色和色谱纯化去除了RNA和DNA,也检测不到其它杂酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定,还具有降解天然蛋白质的能力,因而它应用很广泛,主要用在基因诊断试剂盒、基因组DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒中去除DNA和RNA制备中的核酸酶,也可以用于提取组织中非蛋白成份降解含有蛋白质的杂质。譬如DNA疫苗和肝素的制备等。

 

货号        PTK-100

规格:        每个独立包装中含有100毫克的蛋白酶K(或者客户包装)

比活性值:    40.5 U/mg蛋白,含有50%冻干保护剂。

来源种属:    林伯氏白色念球菌(Tritirachium album limber

分子质量:    29,730

 

贮存和使用:

 

干粉状态可在0~4ºC条件下低温保藏。溶解后分装为适当体积,-20ºC贮存。运输可在室温下进行。

正确的贮存条件下,干粉状态的有效期可达一年。液体状态在-20ºC有效期为半年。打开包装使用后,如果在2~8ºC环境下放置超过一周时间,建议过滤除菌或增加稳定剂,防止微生物污染。

 

贮存和稀释缓冲液:50 mM Tris-HCL缓冲液,2mM CaCL2 (pH 8.0)

 

质量控制:

 

活性单位定义

37ºCpH 7.5条件下,每分钟可水解底物酪蛋白生成1 µmol酪氨酸的蛋白酶K 的量,定义为一个单位(U)。

脱氧核糖核酸酶残留

λ DNA为底物,37ºC消化6小时以上,未检测到脱氧核糖核酸酶活性。

核糖核酸酶残留

25ºC消化16小时以上,未检测到核糖核酸酶活性。

 

酶活测定和稳定性试验

 

(1) 酶活测定 Sigma-Aldrich 方法:

 

(2)纯度和消化蛋白测试(SDS-PAGE

 

 

结果:  蛋白质纯度超过 99% (激光扫描 SDS-PAGE胶)

 

(3)  稳定性测试:(一年数据)

 

 

结论:冻干粉正确储存一年内活性不变;液体酶酶活半年内降低小于5%