HotSensorTM PCR MasterMix
为提升反应特异性提出的解决方案
目录号 | 数量 | 价格 |
HPM-5 | 5×1mL | 530元 |
产品概述
HotSensorTM PCR MasterMix是我们为提高DNA产物的特异性提出的解决方案。
本产品包含HotSensorTM DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液,浓度为2×。其中HotSensorTM DNA聚合酶是一种经过基因改造的热启动酶。在室温下,HotSensorTM DNA聚合酶处于失活状态,只有高温才可以激活其酶活性。同时HotSensorTM DNA聚合酶还存在一个单链DNA黏合蛋白(single-strand DNA binding protein),该蛋白可以将引物隔离。这两个特性使得HotSensorTM DNA聚合酶在常温下能避免非特异性结合与扩增,适用于需要非常高的专一性的实验。
使用预先配制的2× HotSensorTM PCR MasterMix,只需加入引物和模板即可进行扩增,减少了移液操作,最大限度提高了通量和结果的重现性。扩增产物3'端带A,可以直接用于T/A载体克隆。绿色的染料在1%的琼脂糖凝胶中与3-5kb DNA片段的迁移率相同,黄色的染料在1%的琼脂糖凝胶中比引物迁移得快(<50bp)。
使用说明
1.冰浴中彻底融化2×MasterMix,混匀后短暂离心。
2.我们强烈建议客户购买本产品后分装成小份避免反复冻融。
3.以50μl反应体系为例,按照下表在0.2ml PCR管中加入下列成分:
| 50ul反应体系 |
2 × MasterMix | 25ul |
上游引物(10μM) | 1ul |
下游引物(10μM) | 1ul |
模板 | 10pg-0.5ug |
ddH2O | 加至50ul |
4. 短暂离心将反应液收集到管底。
5. 若基因扩增仪不防蒸发,请加1-2滴石蜡油。
6. 在PCR仪上执行以下程序(仅供参考):
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 3-5min | 1 |
变性 | 94℃ | 30sec | 25-35 |
退火 | Tm-5℃ | 30sec |
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延伸 | 72℃ | 1min/kb |
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后延伸 | 72℃ | 5min | 1 |
注:在实际操作中需根据模板的结构、扩增片段的大小和引物的长短等具体情况,设定最佳的反应条件(温度、时间等)。
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