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耐热MMLV逆转录酶

Thermo-stable M-MLV Reverse Transcriptase (RNase H-)


目录号

浓度

规格

价格

FMM-10K

200U/μl

10,000U

300元


产品说明:

反转录酶能以RNA或单链DNA为模板起始合成互补的DNA链。M-MLV Reverse Transcriptase (RNase H-)是M-MLV逆转录酶的多点突变型,点突变去除了RNase H的活性中心,使RNase H的活性降低,减少了逆转录反应中RNA的降解,并提高了酶的耐热能力(在50反转录时,保持了100%活性),且更容易打开模板的高级结构,使cDNA第一链的得率增加,更容易获得全长cDNA。


来源与应用:

来源于含有突变型莫洛尼氏鼠白血病病毒(M-MLV)逆转录酶基因的E.coli菌株。

可应用于第一链cDNA的合成;RT-PCR反应。


产品详情:

活性

定义

以Poly(A)为模板,Oligo (dT)为引物,在37条件下,10分钟内催化掺入1nmol的dTTP所需酶量定义为一个活性单位(U)

储存

缓冲液

20mM Tris-HCl (pH7.5),200mM NaCl,0.25mM EDTA,0.01% NP-40(v/v),2.5mM DTT,50%甘油(v/v)

产品

纯度

200U的本酶和1μg的16S、23S rRNA在37下孵育1h,电泳条带无肉眼可见的变化

反应

缓冲液

[5×RT Buffer(无DTT)]:

250mM Tris-HCl (pH 8.3),15mM MgCl2,375 mM KCl

储存条件

-20保存,有效期三年


推荐的反应条件:

cDNA第一链的合成

1) 在无RNase的PCR管中加入:

Oligo dT12-18(1μg/μl)或基因特异引物2-10pmol或随机引物(50-250ng)1μl;
Total RNA (10ng-5μg)或mRNA(1-500ng)xμl;

dNTP (10mM each)1μl;

DEPC ddH2O (9-x)μl。

2) 70保温10分钟后迅速冰浴2-10分钟。

3) 离心数秒使反应液聚集于PCR管底部。

4) 向上述反应液中加入:5×RT Buffer 4μl;50mM DTT 4μl;RNasin (40U/μl) 1μl并轻轻吸打混匀。

5) 50保温2分钟(Oligo dT12-18或基因特异引物);如果是随机引物则25保温10分钟。

6) 加入1μl MMLV逆转录酶,混匀后50保温30分钟。

7) 70保温15分钟后置冰上冷却,得到cDNA。该产物可直接用于第二链的合成或RT- PCR扩增反应,保存请置于-20




   

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