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   FastaTM多片段一步法克隆试剂盒

   

             

产品名称

规格

货号

价格

FastaTM MultiS One Step Cloning Kit

25 rxn

FMOSC-25  

864

   

       .

           
       

非连接依赖型的多片段一步克隆    

           

                         

         • 适用于向几乎任何载体在任何位点进行多片段拼接克隆    

   

         • 无需考虑插入片段自身携带的酶切位点
       
  • 可一次实现多至五个插入片段的顺序拼接
       
  • 线性化克隆载体和PCR产物可不进行纯化直接克隆    

   

                 

   

       产品描述:    

   

                 

   

         FastaTM技术是一种简单、快速并且高效的DNA定向克隆技术,可将插入片段PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点。将载体进行线性化,并在插入片段PCR引物5’端引入线性化载体的末端序列,使得PCR产物5’3’最末端分别带有和线性化载体两末端一致的序列(15 bp20 bp)。这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化载体按一定比例混合后,在Exnase的催化下,仅需反应30 min即可进行转化,完成定向克隆,阳性率可达95%以上。
       
FastaTM MultiS针对多片段克隆开发,试剂盒中包含有专门针对多片段重组优化的buffer和重组酶Exnase MultiS。使用本试剂盒,可以将多至五个片段一次性顺序拼接。此外,Exnase MultiS还兼容常规酶切、PCR反应体系。载体酶切或PCR产物以及插入片段PCR产物可以不用纯化直接进行反应,极大的简化了实验步骤。      

   

                             

   

           

   

           

   

                   

   

           

   

         图1. 使用FastaTM MultiS进行多片段拼接克隆实验流程
       
   用于重组反应的克隆载体必须首先线性化。线性化可通过酶切或反向PCR获得(图,上左)。插入片段由PCR制备。所用扩增引物在设计时需在其5’端添加同源序列(图中以深蓝色、深灰色、浅蓝色和红色标记),使得扩增产物之间以及扩增产物与线性化克隆载体之间都具有能够相互同源重组的一致序列(图,上右)。在Exnase® MultiS的催化下,线性化载体和插入片段只需在37反应30 min即转化,实现多片段顺序拼接并克隆至目标载体(图,中)。                

   

           

   

           

   

                     

   

         图2. λDNA中扩增0.5 kb1 kb2 kb片段,使用  FastaTM MultiS One Step Cloning Kit将其顺序重组至pUC 19 EcoRIHindIII位点之间。重组反应转化后平板上形成了数百个单克隆,而无插入片段的阴性对照反应转化后只有少数单克隆形成。          

   

           

   

           

   

                 

   

         图三:菌落PCR鉴定重组子。重组反应转化后平板上形成了数百个单克隆中挑取14个进行菌落PCR鉴定。MMarker III1-14, 14个单克隆。如果菌落为自连载体转化形成,则PCR条带应为150 bp左右;如果片段成功插入载体,则PCR条带应为3.5 kb左右。所鉴定克隆有13个为阳性。    

                       

   

        Fasta多片段一步法克隆试剂盒.pdf    

             

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