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   FastaTM一步法克隆试剂盒

           

   

   

产品名称

规格

货号

价格

FastaTM One Step Cloning Kit

50 rxn

FOSC-50  

800

   
   
非连接依赖型的快速克隆技术

           

      • 简单、快速、高效,适用于任何载体

      • PCR产物无需酶切;不依赖于连接酶
   
  • 有效克隆50 bp-10 kbp DNA片段
   
  • PCR产物可不进行纯化直接克隆
   
  • 可用于DNA高效定点突变

           

   产品描述:

           

       FastaTM技术是一种简单、快速并且高效的DNA定向克隆技术,可将插入片段PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点。将载体进行线性化,并在插入片段PCR引物5’端引入线性化载体的末端序列,使得PCR产物5’3’最末端分别带有和线性化载体两末端一致的序列(15 bp20 bp)。这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化载体按一定比例混合后,在Exnase的催化下,仅需反应30 min即可进行转化,完成定向克隆,阳性率可达95%以上。
   
   FastaTM是新一代的重组克隆试剂盒,包含增强的重组酶Exnase® II。和上一代产品相比,Exnase® II中添加了独特的重组增强因子。一方面,这种增强因子可以显著提高重组克隆效率,即便使用低效率感受态细胞(107 cfu/μg)也可实现高效克隆(100 cfu/ng Vector)。另一方面,Exnase® II还兼容常规酶切、PCR反应体系。载体的酶切或PCR产物和插入片段PCR产物可以不进行DNA纯化,直接用于重组克隆,极大的简化了实验步骤。

           

   

           

        图1:使用FastaTM进行基因克隆实验流程
   
    用于重组反应的克隆载体必须为线性化载体。该线性化载体可通过内切酶消化环状载体获得,也可由反向PCR扩增环状载体获得(图,上左)。插入片段由PCR扩增制备。所用扩增引物在设计时需在其5’端添加线性化克隆载体末端序列(图中以红色和蓝色标记)。使用该引物对扩增插入片段,扩增产物5’ 3’ 最末端的序列分别和线性化克隆载体两末端序列完全一致(图,上右)。以线性化克隆载体和插入片段扩增产物配制重组反应体系,37反应30 min即可完成重组反应,实现两线状DNA的体外环化(图,中)。重组产物直接进行转化,平板上会形成数百个单克隆供后期阳性筛选(图,下)。

           

   

   

           

      图2:从λDNA中扩增500 bp片段,使用FastaTM One Step Cloning Kit克隆至pUC 19 EcoRIHindIII位点之间。重组反应转化后平板上形成了数千个单克隆,而无插入片段的阴性对照反应转化后只有数个单克隆形成。

   

         

      图3:菌落PCR鉴定重组子。重组反应转化后平板上形成了数千个单克隆中挑取24个进行菌落PCR鉴定。MMarker III1-24, 24个单克隆。如果菌落为自连载体转化形成,则PCR条带应为150 bp左右;如果片段成功插入载体,则PCR条带应为650 bp左右。所鉴定克隆有23个为阳性。

                       

   Fasta一步法克隆试剂盒.pdf

                 

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